Differences in the internalization of self-inactivating VSVG-pseudotyped murine leukemia virus-based vectors in human and murine cells.

El virus de la leucemia murina pseudotipado VSVG autoinactivante (SIN-VSVG-MLV) se ha utilizado ampliamente para generar líneas celulares estables y producir vectores de administración génica. A pesar del amplio tropismo celular del MLV pseudotipado VSVG, observamos una eficiencia de transducción viral diferencial según el tipo de célula huésped utilizada. Para determinar el mecanismo subyacente a estas diferencias, utilizamos un SIN-VSVG-MLV que expresa GFP y analizamos los principales pasos de la transducción viral en diferentes líneas celulares, incluyendo células epiteliales humanas, linfocitos T, monocitos y fibroblastos murinos. Observamos una mayor eficiencia de transducción en células HeLa, que fue 20 veces mayor que en las células THP-1 y NIH/3T3. Para cuantificar la internalización viral, determinamos el contenido de ARN genómico mediante la cuantificación del producto de transcripción inversa temprana. El ARN genómico y los niveles de transducción se correlacionaron con las células HeLa que mostraron la mayor cantidad de producto de RT temprana, seguidas por las células tsA201, mientras que NIH/3T3, Jurkat y THP-1 tuvieron las cantidades más bajas. Se observaron resultados similares cuando se analizó el producto de transcripción inversa tardía. La eficiencia de la transcripción inversa fue del 66-85% en células HeLa y alrededor del 30% en células tsA201, NIH/3T3, Jurkat y THP-1. La integración viral, determinada por Alu-Nested-qPCR, fue mayor para HeLa y menor para células Jurkat y THP-1. Curiosamente, observamos que la entrada viral se correlacionó con la disponibilidad celular de endocitosis mediada por clatrina, que fue mayor en células HeLa y tsA201, lo que podría explicar las mayores tasas de transducción de SIN-VSVG-MLV y síntesis de RT temprana observadas en estas líneas celulares. En conclusión, el vector SIN-VSVG-MLV mostró tasas de infectividad significativamente diferentes dependiendo del tipo de célula huésped, posiblemente debido a tasas diferenciales de internalización viral.